威尼德雙波全能型電穿孔儀Gene Pulser X2高壓脈沖電穿孔儀是功能強大的將核酸、蛋白質以及其它分子導入多種細胞的高效技術。通過高強度的電場作用,瞬時提高細胞膜的通透性,從而吸收周圍介質中的外源分子。這種技術可以將核苷酸、DNA與RNA、蛋白、糖類、染料以及病毒顆粒等導入原核和真核細胞內。電轉化相對于其它物理和化學轉化方法,是一種有價值和有效的替代方法。廣泛用于植物、動物和微生物的各類細胞電穿孔
1方波
方波脈沖是指電壓瞬間升至預設電壓,保持電壓放電,然后瞬間終止放電。一般哺乳動物細胞電轉染時選擇方波脈沖,有較高的轉染效率和細胞存活率。選擇方波時,有以下參數要進行考慮:場強、脈沖長度、脈沖個數以及脈沖間隔。
方波-主要用于電轉哺乳動物細胞和組織,也可用于細胞融合
場強:兩電極間的電壓大小,用Kv/cm表示,場強改變一般通過調整脈沖電壓或電極間距來實現。
細胞類型、場強范圍、細菌/酵母3-24 kV/cm、哺乳動物細胞、0.25-3 kV/cm、 植物
3-12 kV/cm
脈沖長度:單個脈沖持續的時間,脈沖長度與細胞膜穿孔保持開放的時間緊密相關,如時間太長則導致孔徑無法恢復;如時間太短則外源物質無法通過細胞膜。
脈沖個數和間隔:是指脈沖的個數以及每兩個脈沖之間的間隔。有時為達到優化的分子傳遞效果,我們可以采用多脈沖。
2 指數衰減波
指數遞減波脈沖是先對電容充電,然后讓電容完全放電,其電壓變化呈指數遞減。一般這種波形的脈沖電轉染適用于細菌、酵母菌、昆蟲細胞。選擇指數衰減波時,有以下參數要進行考慮:場強、電容、電阻、時間常數。
指數衰減波-主要用于電轉細菌,酵母,植物(有細胞壁的細胞),有時候對一些哺乳動物細胞也適用
場強:同方波。
電容:容納電場的能力,用uF表示,釋放能量的大小可通過調節電阻來實現。一般我們采用高電壓,低電容或低電壓,高電容。
時間常數:指數衰減波的脈沖長度,用RC表示,為電阻與電容的乘積。指數衰減波時間常數越大,衰減的越慢,反之則越快。
電阻:阻礙電流的能力,有時又內部電阻和外部電阻之分,如BTX電路則是內部樣品電阻與外部設置電阻進行并聯,通過調整外部電阻進而來調節總電阻,進而調節脈沖時間。
Part 3 方波與指數衰減波之間如何轉換?
如果你查閱文獻,只發現有指數衰減波的參數,而你想嘗試方波,那怎么辦呢?接下來讓我們看看這兩種波形如何轉換吧。
從指數衰減波轉換為方波:保持電壓/電極間隙/脈沖時間/脈沖間隔不變;
無需設置電容和電阻參數
脈沖長度為指數衰減波時間常數的一半
從方波轉換為指數衰減波:保持電壓/電極間隙不變
通過調整電阻和電容使時間常數為方波脈沖長度的2倍,
注意:這些轉換都是理論上的,通常方波對哺乳動物細胞更有效,指數衰減波對細菌/酵母更有效。
免責聲明:市場有風險,選擇需謹慎!此文僅供參考,不作買賣依據。
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